Back تفاعل البوليمراز المتسلسل للنسخ العكسي Arabic RT-PCR Catalan Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion German Reverse transcription polymerase chain reaction English RT-PCR Spanish واکنش زنجیره‌ای پلیمراز رونویسی معکوس Persian PCR con transcriptase inversa Galician RT-PCR HE Reaksi berantai polimerase transkripsi-balik ID Reazione a catena della polimerasi inversa Italian

RT-PCR

Tämä artikkeli käsittelee RNA-lähtöistä PCR:ää. Kvantitatiivisesta Real time -PCR menetelmästä katso qPCR
RT-PCR. 1. käänteistranskriptaasi tuottaa RNA:n rinnalle cDNA:n. 2. PCR. A, G, U, T ja C ovat nukleotideja. Kuvassa näkyvät RNA:n ja DNA:n 5'- ja 3'-päiden suunta suhteessa käänteistranskriptaasin synteesin etenemiseen.

RT-PCR on laboratoriotekniikka, jolla monistetaan RNA:ta DNA:n muotoon. Aluksi menetelmässä käytetään käänteistranskriptaasia tuottamaan näytteen RNA:sta DNA:ta. Sitten DNA:ta monistetaan samalla tavoin kuin normaalissa polymeraasiketjureaktiossa eli PCR:ssä.[1] RT-PCR:ää käytetään lääketieteessä leima-aineiden avulla toteamaan muun muassa RNA-virussairauksia, syöpiä ja autoimmuunisairauksia. Menetelmää käytetään myös muussa tieteellisessä tutkimuksessa.[2][3] RT-PCR on lyhenne englanninkielen sanoista reverse transcriptase polymerase chain reaction, eli käänteistranskriptaasipolymeraasiketjureaktio.[4]

RT-PCR:ssä saadaan signaalin voimakkuus (intensiteetti), joka on sitä vahvempi, mitä enemmän näytteessä on tunnistuksen kohteena olevaa RNA:ta. Signaali pohjautuu leima-aineiden fluoresenssiin tai muuhun tunnistustekniikasta riippuvaan havaittavaan muutokseen. RT-qPCR:ssä eli reaaliaikaisessa eli kvantitatiivisessa RT-PCR:ssä (q = eng. quantitative) mukana on intensiteetin lisäksi toisena mittausulottuvuutena aika. RT-qPCR on menetelmänä lähes sama kuin qPCR (kvantitatiivinen eli reaaliaikainen PCR). Pelkässä qPCR:ssä ei kuitenkaan käytetä käänteistranskriptaasia, eli sillä voidaan tutkia vain DNA-näytteitä. RT-qPCR:ssä ja qPCR:ssä jokaisessa DNA:ta monistavassa vaiheessa mitataan leima-aineista saatu signaali. Signaalien muutos saadaan siis eri ajankohtina. qPCR:ää kutsutaan joskus virheellisesti RT-PCR:ksi, jossa "RT" on tässä tilanteessa lyhenne englanninkielen sanoista real time. "RT"-liite on kuitenkin varattu vain käänteistranskriptaasia käyttäville menetelmille.[5]

  1. ↑ Viittausvirhe: Virheellinen <ref>-elementti; viitettä a ei löytynyt
  2. ↑ Viittausvirhe: Virheellinen <ref>-elementti; viitettä b ei löytynyt
  3. ↑ J Murphy, SA Bustin: Reliability of real-time reverse-transcription PCR in clinical diagnostics: gold standard or substandard? Expert Review of Molecular Diagnostics, 2009, 9. vsk, nro 2, s. 187–197. PubMed:19298142. doi:10.1586/14737159.9.2.187. ISSN 1744-8352. Artikkelin verkkoversio.
  4. ↑ käänteistranskriptaasi-PCR finto.fi. Viitattu 24.4.2020.
  5. ↑ P Kralik, M Ricchi: A basic guide to real time PCR in microbial diagnostics: definitions, parameters, and everything. Frontiers in Microbiology, 2017, 8. vsk. PubMed:28210243. doi:10.3389/fmicb.2017.00108. ISSN 1664-302X. Artikkelin verkkoversio.

Developed by StudentB